Сперму от кобеля получают по общепринятой методике. Заготавливать сперму от кобелей возможно 2—3 раза в течение недели. Предварительно внутреннюю полость резиновой камеры дезинфицируют тампонами, смоченными в 70 градусном спирте, а спермоприёмник — кипячением. После дезинфекции резиновую камеру слегка смазывают стерильным разбавителем. Через кран между камерой и корпусом заливают горячую воду, а к узкому концу вагины присоединяют спермоприёмник. Температура в вагине должна быть 41°С, для этого в камеру заливают 250—450 мл воды. Через носик крана подкачивают воздух до смыкания стенок резиновой камеры. Во время получения спермы часть воздуха может быть выпущена.
Сперму от приученного кобеля получают на искусственную вагину в присутствии самки в состоянии охоты. Заранее внутреннюю полость препуциального мешка и волосяной покров снаружи промывают раствором фурацилина (1:5000) и снаружи просушивают стерильными марлевыми салфетками. Под живот подвязывают стерильный фартук с отверстием для пениса. После нескольких фрикций кобеля в вагину, наступление эрекции, эякуляция всех трех фракций спермы происходит в первую минуту. Искусственную вагину снимают с пениса кобеля до окончания эрекции, поворачивают вертикально, спермоприёмником вниз, чтобы вся сперма поступила в спермоприёмник.
Далее от вагины отсоединяют спермоприёмник и полученный эякулят оценивают макроскопически (объём, цвет, запах, консистенция) и микроскопически (густота, подвижность, концентрация, наличие патологических спермиев).
Искусственную вагину подвергают разборке (неполной) и дезинфекции. Отсоединяют кран и из камеры выливают воду. Полость рабочей резиновой камеры тщательно промывают 3%-ным раствором соды, просушивают и промывают дистиллированной водой. Корпус вагины протирают тампонами, смоченными 0,02%-ным раствором фурацилина. Вагину просушивают и хранят в шкафу.
Метод электроэякуляции
Метод обеспечивает возможность получения спермы от самцов, от которых по рефлексологическим или иным причинам невозможно получить сперму другими способами.
Используют прибор для электроэякуляции. Прибор имеет биполярный электрод для введения в прямую кишку. Или используют два электрода: один накладывают на шейку мошонки, другой в прямую кишку. Предварительно животному вводят небольшое количество седативных препаратов. Электрические импульсы, вырабатываемые электродом, воздействуют на срамной и наружный семенной нерв и гладкую мускулатуру половых органов. Гладкие мышцы сокращаются, вызывая эякуляцию. Оптимальные выходные данные прибора: напряжение 16 в, частота 50 Гц. Подают 7—8 импульсов продолжительностью 5 секунд с 10-ти секундными паузами.
Сперму собирают в пластиковый стакан, сделанный из нетоксичной пластмассы. Сперма при эякуляции поступает фракциями. Первая фракция — секрет уретры, прозрачного цвета. Вторая фракция — собственно сперма, белого цвета, по возможности её собирают в отдельный стакан. Третья фракция — секрет простаты — её также собирают в отдельную ёмкость.
7. ОЦЕНКА СВЕЖЕПОЛУЧЕННОЙ СПЕРМЫ
Объём эякулята. Измеряется с помощью градуированного спермоприёмника. Объём первой фракции обычно составляет 0,2—2 мл, второй фракции 0,5—3 мл, третьей фракции — 15—20 мл (эту фракцию обычно не используют).
Цвет эякулята. Первая фракция — прозрачная или может быть с примесью мочи и клеток уретрального канала. Вторая фракция — непрозрачная, белого или кремового цвета. Третья фракция обычно прозрачна. При любом изменении окраски сперма непригодна для дальнейшего использования.
Концентрация спермиев. Считают с помощью стандартных методик в счётной камере. Норма — 300—800 млн в 1 мл.
Общее количество спермиев. 300—1000 млн в эякуляте.
Активность (подвижность). Каплю спермы исследуют на предметном стекле на обогревательном столике Морозова при температуре 37°С. Накрывают тёплым покровным стеклом. Норма — 7 баллов и более, то есть более 70% спермиев имеют прямолинейное поступательное движение.
Подсчёт живых спермиев. Используют общепринятые методики, заключающиеся в смешивании спермы с красителями (чаще с эозином или нигрозин-эозином). Головки мёртвых спермиев хорошо окрашиваются красителем, головки живых — не окрашиваются. В пробе должно содержаться не более 20% мёртвых спермиев.
8. РАЗБАВЛЕНИЕ И ХРАНЕНИЕ СПЕРМЫ
На сегодняшний день существуют следующие методы хранения спермы:
1. Кратковременное хранение при комнатной температуре в течение не более 4-х часов. Используется как разбавленная, так и неразбавленная сперма. Разбавляют сперму пастеризованным молоком 1:8. При осеменении свежеполученной спермой, получают результаты оплодотворяемости, сравнимые с естественной случкой. Процент положительных результатов — около 85%, практически, как при естественном осеменении.
2. Хранение при температуре +5°С
Эякулят сразупосле получения и оценки, разбавляют специальной синтетической средой и сохраняют в охлажденном до +5°С состоянии (в обычном холодильнике) в течение 2—4 суток. Это позволяет транспортировать сперму.
В качестве разбавителя используют различные среды, в состав которые входят вещества, оказывающие защитное влияние на половые клетки.
Разбавители по Шетцу:
1) сухой порошок молока — 10,0; желток куриного яйца 10,0: вода дистиллированная — до 100,0.
2) 2%-ный раствор глицерина с желтком.
3) 5—6%-ная глюкоза или фруктоза с желтком.
4) 3%-ный натрий-цитрат с желтком.
Разбавитель по Баутиной Е.П.: гликокол — 1,82; цитрат натрия — 0,72; желток куриного яйца 5,0; вода дистиллированная до 100,0.
Процедура осеменения собак охлажденной спермой аналогична таковой при использовании свежеполученной спермы, но перед введением в половые пути суки подогревают дозу спермы в водяной бане.
В случае применения высококачественных разбавителей и проведения осеменения в оптимальное по отношению к овуляции время, возможно, получать от охлажденной спермы высокую (75—80%) оплодотворяемость. Но обычно результативность осеменения охлажденной спермой на 20% ниже, по сравнению с использованием свежеполученной спермы.
3. Хранение в жидком азоте (-196°C)
Метод предусматривает использование замороженной в жидком азоте спермы. Срок годности спермы практически не ограничен.
При использовании для искусственного осеменения замороженной спермы, необходимо соблюдать определенные зооветеринарные требования.
Центры по криоконсервации спермы собак работают во многих странах мира и используют практически одинаковые методы её замораживания, но при этом применяют различные синтетические разбавители, в том числе и патентованные.
Сперму кобелей обычно замораживают в виде гранул объёмом 0,2 мл или в полипропиленовых соломинках объемом 0,25 мл. Преимуществами замораживания спермы в соломинках являются лучшие условия стерильности и возможность их маркировки данными о производителе: порода, кличка, дата взятия семени и т. д.
Оттаивают сперму, замороженную в гранулах, при 37°С в изотонических растворах, а соломинки — в водяной бане при 35—37°С.
При использовании замороженной спермы на оплодотворяемость сук оказывают влияние многие факторы: состав синтетической среды, качество спермы, температура ее оттаивания, число биологически полноценных спермиев в дозе, время осеменения, техника осеменения и место введения спермы в половые пути суки.
В дозе спермы перед замораживанием должно содержаться не менее 150—200 млн подвижных спермиев.
Сразу после получения и оценки, эякулят разбавляют в 2—3 раза специальным криозащитным разбавителем, содержащим различные вещества, предохраняющие спермии от повреждений во время замораживания. В частности, в их состав обязательно входят глицерин и желток куриного яйца.
Состав разбавителя:
ТРИС 6,06 гр; фруктоза 2,5 гр: лимонная кислота 3,4 гр; дистиллированная вода 184 гр; глицерин 8 гр; желток 20 гр; трициллин 0,5 гр.
После разбавления сперму охлаждают в холодильнике в течение 2—3 часов до +4°С, а затем замораживают с использованием жидкого азота до температуры -196°С.
При хранении замороженной спермы в жидком азоте (в сосуде Дьюара), она способна сохранять биологическую полноценность в течение многих десятков лет.
Поскольку, в процессе замораживания-оттаивания разрушается до 50%спермиев, желательно вводить дозу непосредственно в полость матки. Процент положительных результатов до 60%.
9. ВЫБОР ОПТИМАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ ДЛЯ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ
Причиной бесплодия часто бывает неправильный выбор времени искус венного осеменения.
По клиническим проявлениям. От появления у суки первых коровянистых выделений искусственное осеменение проводят на 11 — 14 день двукратно с интервалом 48 часов, с учетом феномена охоты (на 3—4 день от начала охоты). Также учитывают отёк вульвы — примерно, через четыре дня от начала уменьшения отёка.
