Брюшная полость. Брюшную полость вскрывают по методике, изложенной в разделе «Микробиологические методы исследования», с той только разницей, что при паразитологическом исследовании нет необходимости соблюдать условия стерильности. Дугообразный разрез к основанию левого грудного плавника начинают от анального отверстия, вводя непосредственно в него тупой конец одной из бранш ножниц. Вскрытую брюшную полость осматривают, а имеющиеся на серозных покровах и брыжейке бугорки исследуют под микроскопом.
Сердце. Для исследования сердце помещают в бактериологическую чашку с физиологическим раствором, вскрывают его полости, промывают и образовавшийся осадок исследуют под микроскопом на наличие возбудителя сангвиниколеза.
Печень. Чтобы обнаружить паразитов, обитающих в печени, ее делят на небольшие кусочки, которые компрессируют и исследуют под лупой и затем при слабом увеличении микроскопа.
Желчный пузырь. Для обнаружения паразитов желчный пузырь вырезают, помещают на предметное стекло, разрезают ножницами, делают соскоб с внутренней оболочки стенки пузыря. Соскоб и сам желчный пузырь помещают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой и микроскопом. В желчном пузыре можно обнаружить простейших и сосальщиков.
Селезенка. Селезенку помещают между двумя стеклами, сжимают до прозрачности и исследуют под микроскопом.
Почки. Для обнаружения паразитов почки компрессируют и исследуют под микроскопом. В почках можно найти споровиков и яйца сосальщиков.
Плавательный пузырь. В случае необходимости соскоб с внутренней оболочки плавательного пузыря можно исследовать под микроскопом компрессорным методом.
Мочевой пузырь. Методика исследования сходна с исследованием желчного пузыря. В мочевом пузыре можно обнаружить сосальщиков, споровиков и инфузорий.
Половые органы. Для обнаружения паразитов железу по частям компрессируют между стеклами и просматривают под микроскопом.
В половых органах встречаются микроспоридии.
Желудочно-кишечный тракт. Пищевод, желудок и кишечник извлекают, освобождают от жира и печени, расправляют и вскрывают ножницами, начиная с пищевода. По ходу вскрытия обнаруженных крупных паразитов (ленточных и круглых червей, сосальщиков) извлекают и помещают в физиологический раствор. Содержимое из различных отделов желудочно-кишечного тракта исследуют компрессорным методом под микроскопом. Затем с помощью скальпеля делают глубокий соскоб со слизистой оболочки из нескольких мест и исследуют на наличие микроскопических паразитов (октомитус).
Мышцы. Чтобы обнаружить мелких паразитов, берут небольшие кусочки мышц из различных частей тела и исследуют компрессорным методом под лупой и под микроскопом при малом увеличении. В мышцах можно обнаружить споровика плистофору и его споры.
Головной и спинной мозг исследуют компрессорным методом. В этих органах можно обнаружить споровиков.
Методы окраски. Мазки крови па наличие кровепаразитов окрашивают азур-эозином по Романовскому — Гимза (0,8 г азура II, 3 г эозина, 250 мл химически чистого глицерина и 250 мл метилового спирта) или метиленовой синью по Машковскому (1 г метиленовой сини и 2,5 г буры растворяют в 100 мл горячей воды).
Готовую, имеющуюся в продаже краску Романовского перед окрашиванием разводят из расчета 2–3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Если готовая краска отсутствует, ее можно приготовить самим. Для этой цели 1 г азура II растворяют в 1 л прокипяченной дистиллированной воды (раствор № 1) и 1 г эозина — в 1 л воды (раствор № 2). Оба раствора хранят отдельно. Перед употреблением на 1 мл нейтральной дистиллированной воды прибавляют по две капли каждого раствора. Продолжительность окраски 20–40 минут. Эритроциты окрашиваются в красный или розовый цвет, протоплазма паразитов и лейкоцитов — в синий, ядра паразитов — в красный, а лейкоцитов — в фиолетовый.
Раствор метиленовой сини перед употреблением разводят дистиллированной водой 1:10 и окрашивают мазки в течение 30 секунд, затем промывают водой и дифференцируют в течение нескольких секунд 5—10 %-ным водным раствором танина. Эритроциты получаются красновато-фиолетовые, протоплазма простейших кровепаразитов — ярко-голубая, ядра лейкоцитов — фиолетовые.
Для изучения морфологии паразитических инфузорий применяют окраску железным гематоксилином по Гейденгайну (протрава 2–2,5 %-ным раствором сернокислых железо-аммиачных квасцов — 1–2 часа, окраска их 1 %-ным спиртовым раствором гематоксилина в течение нескольких часов и дифференциация 1 %-ным раствором 5—10 минут). Окрашивать инфузории можно также гематоксилином Делафильда или квасцовым кармином.
Паразитических жгутиконосцев окрашивают железным гематокслином или по Романовскому — Гимза.
Слизистых споровиков окрашивают 1 %-ным водным раствором метиленовой сини 30–60 минут, затем препарат промывают в воде, последовательно проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96°-ный и абсолютный) и просветляют ксилолом.
Трематод и цестод окрашивают квасцовым кармином. Фиксированные в спирте препараты промывают в течение нескольких часов в проточной или часто сменяемой воде, затем помещают в краску (от 1 минуты до нескольких часов в зависимости от толщины гельминта). Продолжительность окраски можно контролировать, исследуя препараты под микроскопом. Окрашенные препараты переносят в дистиллированную воду, где в течение нескольких минут тщательно промывают от краски. Отмытых от краски паразитов осторожно сушат фильтровальной бумагой и проводят через спирты возрастающей крепости (70, 80, 96°-ный), выдерживая в них несколько часов. Обезвоженных паразитов просветляют гвоздичным маслом и ксилолом.
Цестод, так же как и трематод, можно окрашивать гематеином Майера (1 г гематеина растворяют в 1 л дистиллированной воды с последующим добавлением 0,2 г йодноватокислого натрия и 50 г калийных квасцов). Гематеин допускает как прогрессивное, так и регрессивное окрашивание (без дифференцировки или с ней). При прогрессивном способе красят только 30 минут, при регрессивном — в течение 24 часов. Во втором случае для дифференциации препарат обрабатывают в 1 %-ном солянокислом спирте под контролем микроскопа с последующим тщательным отмыванием краски в проточной воде в течение 20–30 минут.
Хорошие результаты получают при окраске мелких цестод молочнокислым кармином по Блажину. Молочную кислоту разводят вдвое дистиллированной водой, добавляют в нее небольшое количество кармина (в зависимости от желаемой степени окраски) и жидкость кипятят. Красить лучше свежие, нефиксированные объекты. Продолжительность окраски контролируют под микроскопом, а в случае перекрашивания объект переносят в цельную молочную кислоту для обесцвечивания. Окрашенный препарат промывают в течение 20–60 минут водопроводной водой и помещают в бальзам.
Для окраски крупных цестод этот способ модифицирован. Цестод в течение суток промывают в проточной или часто сменяемой водопроводной воде при комнатной температуре. Затем гельминтов помещают на 4–6 часов в краску (0,3 г кармина на 100 мл 30 %-ной молочной кислоты), контролируя интенсивность перекрашивания под микроскопом, после чего на сутки их переносят в дистиллированную воду с добавлением в нее трех капель раствора сернокислого железа и двух капель 1 %-ного раствора карболовой кислоты. В дальнейшем цестод переносят на чистое большое стекло, расправляют на нем и высушивают при температуре 30–37° (не выше, иначе препарат сморщится). Высохший, очень плотно приставший к стеклу препарат заливают канадским бальзамом или канифолью, растворенной в смеси, состоящей из равных частей хлороформа и абсолютного спирта.
Паразитических рачков исследуют в той же жидкости, в которой они хранятся. Красить их не обязательно. Иногда прибегают к окраске борным кармином, эозином, сафранином.
Идентификацию паразитов производят по «Определителю паразитов пресноводных рыб СССР» (издательство АН СССР, 1962) или по схеме, приведенной в руководстве Э. М. Ляймана «Болезни рыб» (Сельхозиздат, 1963).
Глава IV. Лечение больных рыб
(Внимание! Информация в данном разделе существенно устарела, сейчас появилось много новых высокоэффективных средств, а потому к ней стоит относится с некоторой критичностью и поправкой на срок давности)
Борьба с незаразными болезнями аквариумных рыб сводится к установлению определенного температурного и гидрохимического режима для каждого вида и возраста рыб, организации правильного кормления, поддержанию соответствующего санитарного состояния в аквариумах и т. д. Исключение составляют киста, ожирение внутренних органов рыб и сколиоз, которые практически неизлечимы. О профилактике этих болезней необходимо заботиться в первую очередь.
