Таблица 18. Соотношение крови и антикоагулянта
Плазму для определения иммуноглобулинов можно получить из капиллярной крови, взятой с помощью туберкулинового шприца из безымянного или указательного пальца. Предварительно шприц смачивают раствором гепарина (200 ЕД/мл) и высушивают в термостате при 37 °C в течение 24 ч. Шприцы, обработанные гепарином и высушенные, могут храниться в течение двух недель. Кровь из пальца берут в объеме 0,5 мл, переносят в центрифужную пробирку и несколько раз встряхивают. Затем кровь центрифугируют при 1 тыс. оборотов в минуту 5 мин. Плазму отсасывают в пластиковые пробирки.
Полученная кровь должна быть своевременно доставлена в лабораторию. От забора до анализа кровь может стоять при комнатной температуре 2 ч, сыворотка – 48 ч в холодильнике. Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 ч при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике (температура 4–8 °C). Наступающий гемолиз может повлиять на результаты анализа. Лучше всего сразу после взятия крови отобрать из нее сыворотку или плазму. Плазму можно хранить при -20 °C более длительное время.
Осадок используют для приготовления клеточной суспензии. Для этого к осадку, полученному из 0,5 мл крови, добавляют 1 мл 1 %-ного раствора желатина, приготовленного на среде 199. Ставят в термостат при 37 °C на 30 мин. Отбирают в центрифужную пробирку надосадочный слой, состоящий из клеток белой крови. К надосадочной жидкости добавляют 2–3 мл среды 199. Тщательно перемешивают. Центрифугируют при 1 тыс. оборотов в минуту 10 мин. Надосадочную жидкость сливают. К осадку добавляют 0,5 мл среды 199 и с помощью интенсивного 3-4-кратного пипетирования размешивают. Лейкоцитарная взвесь готова к употреблению.
Для определения групп крови по системе АВО используют капиллярную и венозную кровь. Взятие капиллярной крови проводит лаборант непосредственно перед определением. 0,05 мл крови сухой стеклянной палочкой наносят рядом с каждой каплей стандартной сыворотки.
Кровь можно брать из вены, пальца или из мочки уха. Исследуемую кровь берут в сухую несиликонированную пробирку. Для отделения сыворотки кровь центрифугируют и оставляют стоять на 20–30 мин. Из пробирки, содержащей исследуемую кровь, пипеткой извлекают сыворотку. Пробирку со свернувшейся кровью энергично встряхивают для отделения эритроцитов.
Температура в помещении, где проводится исследование, должна быть 15–25 °C (при температуре воздуха выше 25 °C агглютинация может быть не замечена, ниже 15 °C – может появиться неспецифическая агглютинация).
Для определения резус-фактора исследуют эритроциты крови.
Кровь из вены берут в сухую пробирку в количестве 3 мл. После свертывания крови отделяют сыворотку от сгустка. Эритроциты отмывают от остатков сыворотки изотоническим раствором хлористого натрия. Для этого пробирку с кровью на 3/4 заполняют изотоническим раствором, содержимое перемешивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают из отмытых эритроцитов, готовят 2 %-ную взвесь. В промаркированных пробирках смешивают 2,45 мл изотонического раствора и 0,05 мл осадка отмытых эритроцитов.
Кровь стабильна при 4–8 °C в течение 2–3 суток.
Микробиологические исследования
Общими требованиями к процедуре отбора и транспортировки проб являются:
1) знание оптимальных сроков для взятия материала на исследование;
2) взятие материала с учетом места максимальной локализации возбудителя, путей выделения в окружающую среду;
3) отбор материала для исследования в необходимом и достаточном объеме с обеспечением условий, исключающих контаминацию проб;
4) по возможности – взятие материала до применения антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов или после отмены антибиотиков через 2–3 дня;
5) материалы, подлежащие бакобследованию, собирают в стерильную посуду, снабжают этикеткой с фамилией обследуемого и наименованием материала. В сопроводительном документе-направлении необходимо указать, какое отделение направляет материал, Ф.И.О. и возраст больного, предполагаемый диагноз, антибактериальную терапию, дату и час взятия пробы;
6) материал доставляется проинструктированным медработником в контейнерах, не допуская опрокидывания. При транспортировке не допускается смачивание ватных пробок и замораживание материала;
7) материал доставляется немедленно или в течение 1–2 ч. При невозможности доставки в указанные сроки биоматериал хранят в холодильнике, кроме крови и материала, исследуемого на наличие менингококка. При увеличении времени доставки проб до 48 ч необходимо использовать транспортные среды;
8) доставленные в лабораторию пробы должны быть размещены в специально отведенном месте для приема биоматериала. На работников лаборатории при приеме возлагается контроль за соблюдением правильной доставки образцов;
9) категорически запрещается доставка материала в лабораторию обследуемыми лицами;
10) в случае несоблюдения условий образцы не подлежат обработке, и об этом сообщается лечащему врачу для повторного проведения исследования.
Инструкция по взятию исследуемого материала для микробиологических исследований
Кровь
Кровь у больного берут процедурная сестра и лаборант в процедурном кабинете или в палате в зависимости от состояния больного.
Кровь для посева рекомендуется брать по возможности до начала антибиотикотерапии или через 12–24 ч после последнего введения препарата больному.
Посев проводится во время подъема температуры.
Рекомендуется брать кровь 2–4 раза в сутки, при остром сепсисе – 2–3 взятия из различных мест в течение 10 мин.
При наличии у больного постоянного подключичного катетера или капельницы в вене можно воспользоваться ими для получения крови только в течение 3 дней, так как наступает контаминация катетера. Некоторому количеству крови дают свободно стечь в пробирку, затем набирают кровь в шприц для посева. Посев крови производят над спиртовкой.
Кровь берется у взрослых в количестве 5-20 мл, а у детей – 1-15 мл и из шприца без иглы над спиртовкой засевается во флаконы с питательной средой в соотношении крови и среды 1:10. Флаконы с кровью доставляются в лабораторию немедленно.
Спинномозговая жидкость
Взятие ликвора проводится как можно раньше, желательно до начала антибиотикотерапии.
Берут ликвор в стерильную пробирку с крышкой в количестве 1–3 мл.
Доставляют в лабораторию, где тотчас, пока ликвор теплый, его подвергают анализу; при отсутствии такой возможности материал сохраняют при температуре 37 °C в термостате в течение 2–3 ч.
Во время транспортировки ликвор следует тщательно предохранять от охлаждения. Для этого используют грелки, термос.
Моча
Исследуют, как правило, утреннюю порцию мочи.
До взятия мочи проводится предварительный туалет наружных половых органов.
При мочеиспускании первая порция мочи не используется. Начиная с середины мочеиспускания, моча собирается в стерильную посуду в количестве 3-10 мл, плотно закрывается стерильной пробкой.
Желательно доставлять пробы мочи в лабораторию немедленно. При отсутствии такой возможности моча может храниться от момента взятия до начала исследования при комнатной температуре 1–2 ч и не более 24 ч при температуре 4 °C.
Кал
При инфекционных заболеваниях (ОКИ, тифо-паратифозные заболевания, дизентерия) и внутрибольничных инфекциях желудочно-кишечного тракта материал берется с первых часов и дней поступления больного до начала антибиотикотерапии.
Взятие образцов производится минимально 2 раза. Испражнения для посева берут сразу после дефекации. Сбор их осуществляется из судна, горшка, пеленки, тщательно дезинфицированных и многократно отмытых горячей водой. Из посуды кал забирают стерильным шпателем или палочкой в стерильные банки с крышкой, пробирки. В отбираемые пробы включают патологические примеси (гной, слизь, хлопья).
При невозможности получения испражнений материал забирают непосредственно из прямой кишки с помощью ректальных тампонов. Тампон смачивают в физрастворе, вводят на 8-10 см и затем помещают в стерильную пробирку.
Кал доставляют в лабораторию не позднее 1–2 ч после сбора. Материал может сохраняться при температуре 2–6 °C 24 ч.
Исследование абсцесса
Исследуют гной, биоптат стенок абсцесса.
Исследуемый материал в максимально возможном количестве берется стерильным шприцем и в нем же с закрытой иглой доставляется в лабораторию немедленно либо может храниться в холодильнике 2 ч.
Мокрота
Больной перед откашливанием чистит зубы и полощет рот кипяченой водой. Мокроту собирают в стерильную банку или флакон с крышкой.
Если мокрота отделяется плохо, рекомендуется накануне назначить отхаркивающее или дать больному вдохнуть 25 мл 3-10 %-ного физраствора через распылитель.
