Унифицированная методика определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Л. И. Идельсона
Принцип
Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах хлорида натрия.
Нормальные величины
У здоровых людей в свежей крови гемолиз (минимальная резистентность эритроцитов) начинается при концентрации хлорида натрия 0,50-0,45 %, а полный гемолиз (максимальная резистентность эритроцитов) наблюдается в 0,40-0,35 %-ном растворе хлорида натрия.
Клиническое значение
Исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Понижение осмотической резистентности, т. е. появление гемолиза эритроцитов при более высокой, чем в норме, концентрации хлорида натрия (0,70-0,75 %) наблюдается при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, а также иногда при аутоиммунной гемолитической анемии. В ряде случаев понижение осмотической резистентности характерно для талассемии, гемоглобинопатий, возможно при механической желтухе.
Пробы на ферментопатию эритроцитов В эритроцитах протекают различные метаболические процессы: гликолиз, пентозофосфатный путь окисления глюкозы, восстановление глутатиона, разрушение перекиси водорода и другие реакции метаболизма. Нарушения этих процессов могут быть связаны с наследственными дефектами синтеза ферментов (энзимопатии). Наиболее распространенной ферментопатией эритроцитов является нарушение синтеза глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) – ключевого фермента пентозофосфатного пути окисления глюкозы. Существует обратное соотношение между активностью Г-6-ФДГ и резистентностью эритроцитов, поэтому дефицит Г-6-ФДГ в клетке может приводить к гемолизу эритроцитов (гемолитический криз) при приеме пациентами ряда препаратов, действующих как оксиданты, – противомалярийных средств (примахин), ацетилсалициловой кислоты, сульфаниламидов, нитрофуранов, 5-НОК, ПАСК, фенацитина и др. Для диагностики дефицита Г-6-ФДГ применяются как качественные методики, так и количественные определения ее активности в эритроцитах.
Тест на образование телец Гейнца – Эрлиха
Нормальные величины
У здоровых людей в эритроцитах наблюдается образование единичных телец красного цвета. Небольшое количество телец Гейнца обнаруживают в клетках новорожденных или больных после спленэктомии.
Клиническое значение
В эритроцитах с дефицитом Г-6-ФДГ обнаруживается 4–6 телец. Проба неспецифична, поскольку тельца Гейнца появляются в эритроцитах при передозировке сульфаниламидных препаратов, отравлениях анилиновыми красителями, дефиците других ферментов (глутатион-редуктазы, 6-фосфоглюконатдегидрогеназы), у носителей нестабильных гемоглобинов.
Качественная методика Мотульского – Кемпбеля
Нормальные величины
У здоровых людей смесь обесцвечивается через 40–55 мин.
Клиническое значение
Замедление времени обесцвечивания смеси более 90 мин свидетельствует о дефиците в эритроцитах Г-6-ФДГ. При гемолитической энзимодефицитной анемии обесцвечивание наступает через 3-24 ч.
Качественная методика по Бернштейну
Нормальные величины
У здоровых людей обесцвечивание смеси происходит через 15–20 мин.
Клиническое значение
Удлинение времени обесцвечивания свидетельствует о дефиците в эритроцитах Г-6-ФДГ. Неполное обесцвечивание за 30 мин соответствует незначительному уменьшению активности фермента, а отсутствие обесцвечивания к этому времени – резкому ее снижению.
Цитохимические исследования эритроцитов
Цитохимические методы исследования основаны на химических реакциях, позволяющих обнаружить в клетках полисахариды, липиды, нуклеиновые кислоты, ферменты и другие соединения. Цитохимические исследования обычно отличаются простотой, не требуют специального оборудования и дают ориентировочное представление о количестве определяемого вещества. При цитохимическом исследовании чаще всего пользуются полуколичественной оценкой результатов, основанной на степени интенсивности специфической окраски.
В зависимости от нее делят все элементы на 4 степени:
1) отрицательные, т. е. неокрашенные (—);
2) слабо положительные (+);
3) положительные (++);
4) резко положительные (+++).
Цитохимические исследования эритроцитов проводят с целью выявления различных внутриклеточных включений, наличия разных форм гемоглобина, ферментных нарушений.
Определение негемоглобинового железа
Сидероциты и сидеробласты – это эритроциты и эритробласты (нормобласты), содержащие в цитоплазме негемоглобиновое железо в виде гемосидерина и ферритина.
Нормальные величины
В периферической крови число сидероцитов не превышает 1,1 % и составляет в среднем 0,6 ± 0,04 %; в костном мозге их несколько больше – 0,2–2,1 %; количество сидеробластов (ядерных эритроцитов с железосодержащими гранулами) в костном мозге – 23,7 ± 2,4 %.
Клиническое значение
Снижение сидероцитов и сидеробластов характерно для железо дефицитных анемий. Повышение железосодержащих клеток наблюдается при гемолитических анемиях, после спленэктомий, при миелодиспластическом синдроме (рефрактерной сидеробластной анемии), эритромиелозе.
Методика определения фетального гемоглобина по Бетке
Нормальные величины
У взрослых встречаются единичные окрашенные эритроциты (содержащие гемоглобин F); увеличение числа окрашенных эритроцитов наблюдается у новорожденных и детей до 5-месячного возраста.
Клиническое значение
Увеличение числа эритроцитов с HbF наблюдается у больных гомозиготной талассемией (до 5 %), серповидноклеточной анемией (1-30 %). До 10 % HbF можно обнаружить при пароксизмальной ночной гемоглобинурии, рефрактерной сидеробластной анемии, острых лейкозах, врожденном хроническом миелолейкозе. Снижение HbF наблюдается при гемолитической анемии новорожденных.
Активность Г-6-ФДГ (К.Ф.1.1.1.49)
Нормальные величины
В эритроцитах здоровых людей обнаруживают 10–20 гранул формазана.
Клиническое значение
Снижение числа гранул формазана в эритроцитах или их отсутствие указывает на дефицит Г-6-ФДГ. Прием противомалярийных препаратов, фенацетина, больших доз аскорбиновой кислоты, некоторых сульфаниламидов у таких больных может вызвать гемолитическую анемию. Случаи гемолиза возможны при отравлении бобами, диабетическом ацидозе.
Скорость оседания эритроцитов (Erytrocyte Sedimentation Rate)
Скоростью оседания эритроцитов (СОЭ) называется скорость разделения несвернувшейся крови на два слоя: нижний, состоящий из осевших эритроцитов, и верхний – из прозрачной плазмы.
Исследование СОЭ является одним из самых распространенных методов в лабораторной практике и входит в состав общего клинического анализа крови.
Унифицированная методика Панченкова
Принцип
Свойство крови, смешанной с цитратом натрия, не свертываться при стоянии, а разделяться на два слоя: нижний – эритроциты, верхний – плазма. Расслоение происходит с различной скоростью в зависимости от изменения химических и физических свойств крови. Скорость оседания измеряется в 1 мм за 1 ч.
Нормальные величины
У здоровых мужчин 1-10 мм/ч, у женщин 2-15 мм/ч. У детей на протяжении 1 года жизни СОЭ колеблется между 5,0 + 2,0 мм/ч и 8,0 + 3,0 м/ч, в дальнейшем – между 7,0 + 3,0 м/ч и 9,0 + 3,0 м/ч.
Примечание. При температуре воздуха в помещении, где проводится исследование, ниже 20 °C СОЭ замедляется, выше 20 °C – увеличивается.
Ошибки при постановке СОЭ:
1) нарушение соотношения крови и цитрата;
2) неполное заполнение капилляра;
3) неправильная постановка капилляра;
4) некачественный раствор цитрата натрия;
5) постановка СОЭ позже 2 ч после взятия крови;
6) отклонение температуры;
7) образование сгустка;
8) грязный капилляр;
9) неоткалиброванные капилляры.
Клиническое значение
Одной из основных причин увеличения СОЭ является изменение соотношения между белковыми фракциями крови в сторону увеличения доли крупнодисперсных белков. Играет роль и соотношение между холестерином и лецитином. Уменьшение количества эритроцитов также ведет к увеличению СОЭ. Наиболее частой причиной увеличения СОЭ являются воспалительные заболевания самой различной этиологии (пневмония, сепсис, холецистит), острые и хронические инфекции (туберкулез, инфекционный мононуклеоз, краснуха), инфаркт миокарда, анемии, оперативные вмешательства, беременность, гипопротеинемии. Особенно значительные величины СОЭ отмечены при парапротеинемических гемобластозах (до 60–80 м/ч) и и симптоматических парапротеинемиях, сопутствующих злокачественным новообразованиям (особенно при распаде опухоли), хроническому активному гепатиту, циррозу печени, системным заболеваниям соединительной ткани. Замедление СОЭ наблюдается при истинной полицитемии, гиперпротеинемии, механической желтухе, вирусном гепатите и симптоматических эритроцитозах.
