Абсцесс легкого
Мокрота появляется только при прорыве абсцесса в бронх. Необходимо ежедневно измерять суточное количество мокроты. Мокрота, как правило, гнойная, нередко появляются прожилки крови или кровохарканье. Кровохарканье в более поздние фазы процесса служит нередко предвестником профузного легочного кровотечения. При микроскопическом исследовании осадка обнаруживается большое количество разрушающихся лейкоцитов, кристаллы гематоидина, холестерина, жирных кислот. Чаще всего в мокроте присутствует смешанная микрофлора. Необходимо исключить наличие туберкулезного процесса и злокачественных опухолей.
Глава 5 Биохимические методы исследования
Биохимические методы исследования биологических жидкостей в клинической лабораторной диагностике
Исследование белков плазмы крови
Плазма крови здорового человека содержит более 200 различных белковых компонентов.
Большая часть выполняемых кровью функций так или иначе связана с белками плазмы:
1) поддержание коллоидно-осмотического давления;
2) участие в процессах свертывания крови;
3) регуляция рН крови;
4) транспортная функция;
5) защитная функция;
6) функция «белкового резерва» и др.
К белкам плазмы крови относится группа белков, удовлетворяющих следующим требованиям:
1) содержатся в плазме крови;
2) синтезируются в печени или ретикулоэндотелиальной системе;
3) проявляют основную функцию в пределах сосудистой системы;
4) в кровь секретируются, а не попадают в результате повреждения тканей;
5) находятся в плазме в большей концентрации, чем в других биологических жидкостях;
6) могут проявлять генетически обусловленный полиморфизм или иметь вариантные формы, но это не связано с их тканевым происхождением;
7) не являются продуктами катаболического протеолиза в плазме, но могут быть продуктами ограниченного протеолиза;
8) имеют большее время биологического полураспада в плазме, чем время транспорта по крови.
Основными представителями белков плазмы крови являют ся альбумины, глобулины и фибриноген.
В клинической практике большее развитие получили исследования не плазмы, а сыворотки крови, т. е. крови, лишенной форменных элементов, фибриногена и части белков свертывающей системы.
Общее содержание белка в сыворотке крови определяется различными способами: рефрато-, осмо-, вискозиметрически, спектрофотометрически, биуретовым методом и т. д. Наибольшее распространение в практике КДЛ получил фотометрический биуретовый метод определения общего содержания белка (унифицированный метод).
Унифицированные методы исследования в биохимической лаборатории
Фотометрические методы исследования
В клинико-диагностических лабораториях для исследования состава и свойств биологических жидкостей широко используются фотоэлектроколориметры, фотометры, спектрофотометры, нефелометры, флуориметры, рефрактометры, хемилюминометры. Эти приборы и построенные на их основе анализаторы образуют класс фотометрических приборов. Своим названием этот класс приборов обязан фотометрическому принципу детектирования результата: измерение энергии светового потока с помощью фотодетекторов, преобразующих световую энергию в электрический сигнал.
Фотометрические методы исследования базируются на способности растворов поглощать, отражать или рассеивать электромагнитное излучение. Жидкие среды могут даже излучать электромагнитную энергию под воздействием световой энергии возбуждения или в результате химической реакции.
Абсорбционный метод анализа
На абсорбционном методе анализа основан принцип действия самых распространенных фотометрических приборов для лабораторных исследований – спектрофотометров и фотоколориметров.
Фотоколориметры предназначены для определения количества окрашенного вещества путем измерения величины поглощения и пропускания в видимой части электромагнитного спектра.
Принцип работы колориметра
Источником света для видимого участка спектра служит вольфрамовая лампа накаливания, которая формирует световой поток.
Диафрагма из светового потока вырезает узкий луч, создавая как бы «точечный» источник света. Оптическая система формирует параллельный поток световой энергии, который проходит через полосовой фильтр. Фильтр пропускает световой поток с максимальной длиной волны в диапазоне длин волн. Площадь и форма пятна, образуемого световым потоком на чувствительной площадке детектора-фотоприемника, остается постоянной. Она не зависит в заданных пределах от объема раствора в кювете и смены кюветы в кюветном отделении.
Фотоприемник трансформирует световую энергию в электрическую. Аналоговый сигнал в виде тока преобразуется аналого-цифровым преобразователем в цифровую форму. Микро-ЭВМ пересчитывает цифровой сигнал, принятый с преобразователя, в единицы измеряемых параметров.
Основное назначение абсорбциометрических приборов – определение концентрации растворов с исследуемым веществом посредством сравнения величин поглощения или пропускания световой энергии исследуемого раствора и раствора известной концентрации. В настоящее время в КДЛ можно встретить большое разнообразие по конструкции и характеристикам колориметров, фотометров, спектрофотометров.
Приборы могут отличаться:
1) по форме представления информации (в единицах оптической плотности, в единицах концентрации, в единицах светопропускания или в любых других значениях, по которым была произведена калибровка;
2) по способу подачи в прибор исследуемого раствора (проточная кювета, коммутируемая кювета, 96-луночный планшет и т. д.;
3) по способу построения и хранения калибровочных значений (ручное, автоматическое, длительное или краткосрочное);
4) по виду источника излучения световой энергии (разнообразные лампы накаливания: вольфрамовые, импульсные, газоразрядные, светодиоды, лазеры);
5) по конструкции оптической системы (одноканальные и многоканальные).
Фотометры (колориметры) работают в спектральном диапазоне 340–700 нанометров (нм). Диапазон работы спектрофотометров значительно шире – 200–950 нм. Многие современные приборы имеют процессоры, запоминающие устройства, которые позволяют автоматизировать процесс построения градуировочных характеристик самих приборов. Современные динамометрические приборы могут работать с минимальными объемами раствора в диапазоне 10-500 мкл.
Нефелометрический метод анализа
Этот вид исследования проводится в дисперсных средах с целью определения концентрации, размера и формы диспергированных частиц.
Аппаратура для нефелометрических исследований представляет собой специализированные спектрофотометры, которые называются нефелометрами. Они предназначены для измерения интенсивности рассеянного света под углом к направлению падающего на раствор светового потока. Длины волн, используемые в большинстве нефелометров, находятся в диапазоне 340–650 нм. Системы «антиген – антитело» содержат гетерогенные популяции частиц с размерами от 250 до 1500 нм, а используемые в аппаратуре длины волн – величины того же порядка, что и размеры исследуемых частиц. Поэтому большая часть света будет рассеиваться под углом 90°. Хотя для измерения рассеивания света датчики установлены под углом от 5 до 90°, наилучшие характеристики по чувствительности будут достигнуты, если измерять интенсивность света, рассеянного под углом 90°.
Турбидиметрический метод анализа Данный вид исследования мутных сред основан на измерении изменения интенсивности потока световой энергии, прошедшего через дисперсную систему. Изменение потока световой энергии вызвано как поглощением, так и его рассеянием дисперсной системой. Преимущество турбидиметрического анализа заключается в том, что измерения могут быть выполнены практически на любом колориметре или фотометре. Повышение чувствительности турбидиметрических исследований может быть достигнуто за счет использования спектрофотометров с высококачественными детекторами.
Флуориметрический метод анализа
Этот метод основан на явлении, которое называется флуоресценцией. Световая энергия, поглощенная атомами или молекулами, отдается ими в виде светового же излучения.
Спектр излучения флуоресценции многих веществ носит избирательный характер. Он не зависит от длины волны возбуждающего света. Это показывает, что спектр флуоресценции характеризует исследуемое вещество и является основой для обнаружения и идентификации этих веществ. Существуют многочисленные физико-химические факторы отклонения от пропорциональности энергии поглощения и энергии флуоресценции от концентрации исследуемого раствора. При практических определениях концентрации раствора по световой энергии требуется предварительное построение градуировочных кривых. Градуировочная кривая строится по результатам измерений флуоресценции растворов с известной концентрацией.
