В течение 3–7 дней до начала теста обследуемый находится на обычной диете без ограничения и избытка жиров и углеводов.
За 3 дня отменяются инъекции глюкозы, кофеина, адреналина. В течение 3 дней пациент не должен изменять привычного режима питания и мышечной нагрузки, получая диету, содержащую не менее 150 г углеводов в сутки. В день, предшествующий проведению теста, последний прием пищи не позднее 20 ч. Перед проведением пробы необходимо 30 мин спокойно посидеть. Во время проведения пробы нельзя курить.
Кровь берут из пальца или из вены натощак и через 120 мин после перорального введения глюкозы (250–350 мл водного раствора глюкозы из расчета 1,75 г глюкозы на 1 кг массы обследуемого, для взрослого 75 кг, не более 75 г глюкозы для ребенка).
Если уровень глюкозы натощак превышает 8 ммоль/л, тест обычно прерывается.
Гликозилированный гемоглобин
Для скрининга населения на сахарный диабет определяют гликозилированный гемоглобин (HbAic). Определение HbAic может быть использовано также для диагностики ранних форм диабета (достоверно повышен у лиц с нарушенной толерантностью к глюкозе), для контроля за состоянием и лечением больных сахарным диабетом.
Гликозилированный гемоглобин – показатель гомеостаза глюкозы, интегральный показатель транзиторной гипергликемии, имевшей место у пациента в течение 3–4 месяцев, предшествующих определению.
В зависимости от метода определения содержание HbAic составляет 3–6 % от общего гемоглобина у здоровых лиц и около 20 % у пациентов с тяжелыми, запущенными, некомпенсированными формами сахарного диабета.
При определении HbAic используются методы хроматографии, электрофореза и изоэлектрического фокусирования. Эти методы характеризуются высокой точностью, но требуют специальной аппаратуры и реактивов, трудоемки в исполнении, поэтому наибольшее распространение получили менее точные, но более доступные химические колориметрические методы. Преимуществом этих методов является возможность использовать в качестве стандарта фруктозу и то, что условия взятия и хранения крови, гемоглобинопатии мало влияют на результаты анализа; эти методы не требуют специального оборудования, удобны для повседневного использования, могут быть выполнены с помощью готовых наборов реактивов.
Для работы используют цельную кровь, взятую с антикоагулянтами, эритроциты многократно отмывают от белков и глюкозы изотоническим (0,9 %) раствором хлорида натрия. Отмытые эритроциты до исследования могут храниться в холодильнике до 2 недель.
Липиды
В плазме крови человека присутствуют 4 основных класса липидов: холестерин и его эфиры, триглицериды, фосфолипиды! и неэстерифицированные жирные кислоты (НЭЖК). Первые три класса веществ образуют комплексы с апопротеинами и входят в состав липопротеинов.
Различают 3 группы липопротеинов. Наиболее крупными являются хиломикроны (ХМ) и липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП, или пребеталипопротеины). Они богаты триглицеридами, содержат апопротеины С. Менее крупными частицами являются липопротеины низкой плотности (ЛПНП или беталипопротеины), которые содержат апопротеины В. Самыми мелкими являются липопротеины высокой плотности (ЛПВП или альфалипопротеины), в состав которых входят апопротеины А.
На основании детального изучения липопротеинового спектра плазмы (сыворотки) крови у здоровых лиц и у больных, страдающих различными нарушениями липидного обмена, было показано, что повышение уровня тех или иных классов липопротеинов крови протекает по строго определенным закономерностям, независимо от того, является ли гиперлипопротеинемия наследственной (первичной) или она развивается вследствие других причин (вторичная гиперпротеинемия). Почти все случаи гиперлипопротеинемий могут быть объединены в 5 типов.
Таблица 25. Типы дислипопротеинемий
Предварительное выявление дислипопротеинемий можно провести по визуальной оценке сыворотки крови (табл. 25).
Определение содержания холестерина и триглицеридов в плазме
Определение содержания холестерина и триглицеридов в плазме или сыворотке крови позволяет решить вопрос, о каком типе гиперлипидемий может идти речь.
Среди многочисленных методов определения холестерина в сыворотке крови наиболее распространен прямой метод, в основе которого лежит реакция Либермана – Бурхарда (метод Илька).
Клиническое значение
В норме холестерина крови 3,9–7,2 ммоль/л. Повышение показателя имеет место при семейной гиперхолестеринемии (ксантоматозе), гипотиреозе, декомпенсированном сахарном диабете, нефротическом синдроме, хроническом гепатите, билиарном циррозе, механической желтухе, гипопротеинемии, липидемии.
Показатели могут снижаться при остром гепатите и болезни Гоше; иногда при гипертиреозе, острых инфекциях, анемии, недоедании. Концентрация холестерина зависит от его метаболизма, на который влияют наследственность, питание, эндокринные железы и состояние внутренних органов.
Холестерин липопротеидов высокой плотности
Холестерин липопротеидов высокой плотности является интегральным показателем состояния обмена липопротеидов. Для определения холестерина ЛПВП (альфа-ХС) пользуются методом, в основу которого положен принцип: бетаи пребета-липопротеины осаждаются гепарином в присутствии солей марганца и удаляются центрифугированием, при этом хилосинкроны всплывают, образуя пленку. В растворе остаются только альфа-липопротеины, в которых содержание холестерина определяют любым унифицированным методом.
Калибровочную пробу ставят так же, как и в методе определения холестерина, но калибровочный раствор должен соответствовать содержанию холестерина 1–2 ммоль/л.
Нормальные величины альфа-XC 0,9–1,9 ммоль/л. Содержание альфа-холестерина в крови здоровых людей мало меняется с возрастом и не подвержено колебаниям. Величины ниже 0,9 ммоль/л свидетельствуют о нарушении липидного обмена и угрозе развития атеросклероза.
Уровень общего холестерина выше 6,23 ммоль/л требует определения содержания триглицеридов.
Триглицериды
Унифицированным является метод определения триглицеридов по реакции с ацетилацетоном после экстракции смесью гептана и изопропилового спирта.
Клиническое значение
В норме триглицериды плазмы крови – 0,55-1,65 ммоль/л.
Повышение содержания триглицеридов возникает при гиперлипопротеинемии I, 11б, III, IV и V типов, вирусном гепатите, алкоголизме, циррозе печени, обтурации желчных путей, панкреатите, гипертонической болезни, ИБС, гипотиреозе, сахарном диабете.
Снижение уровня триглицеридов развивается при плохом питании или врожденной альфа-беталипопротеинемии.
Исследование показателей липидного обмена нашло широкое применение в лабораторной клинической диагностике ввиду значимости выявления гиперлипидемии как фактора риска развития атеросклероза.
Для оценки вероятности атеросклероза рекомендуется следующая шкала показателей ХС, ТГ и альфа-ХС (табл. 26).
Таблица 26. Шкала показателей ХС, ТГ и альфа-ХС
Лабораторная диагностика нарушений ферментного обмена
Наиболее важным в диагностическом процессе является исследование ферментов плазмы крови. Ферменты, которые обнаруживаются в норме в плазме или сыворотке крови, условно можно разделить на 3 группы: секреторные, индикаторные и экскреторные.
Секреторные ферменты, синтезируясь в печени, в норме выделяются в плазму крови, где играют определенную физиологическую роль. Типичными представителями данной группы являются ферменты, участвующие в процессе свертывания крови, и сывороточная холинэстераза.
Индикаторные (клеточные) ферменты попадают в кровь из тканей, где они выполняют определенные внутриклеточные функции. Одни из них находятся главным образом в цитозоле клетки (ЛДГ, альдолаза), другие – в митохондриях (глутаматдегидрогеназа), третьи – в лизосомах (кислая фосфатаза) и т. д.
Экскреторные ферменты синтезируются главным образом в печени (щелочная фосфатаза, лейцинаминопептидаза и др.).
Особый интерес для клиники представляет исследование активности индикаторных ферментов в сыворотке крови, так как по появлению в плазме или сыворотке крови ряда тканевых ферментов в повышенных количествах можно судить о функциональном состоянии и поражении различных органов.
В клинической практике наиболее часто определяется активность ферментов АлТ, АсТ, ГГТП, ИЗФ, ЛДГ, альфа-амилазы и КК.
Аминотрансферазы
При участии аминотрансфераз (АсТ и АлТ) в организме происходят процессы переаминирования – обратимого переноса аминогрупп аминокислот на кетокислоты. Аминотрансферазы имеют высокую каталитическую активность и широко представлены в различных тканях: печени, мышцах, миокарде, почках.
Наиболее распространенным методом определения активности аминотрансфераз является унифицированный динитрофенилгидразиновый метод Райтмана – Френкеля.
