представлены двумя различными аллелями, но у людей одному и тому же локусу могут соответствовать десятки аллелей. Аллели, которые в большом разнообразии присутствуют у людей, называют высокополиморфными. Чем больше исследуется локусов с высокополиморфными аллелями, тем точнее становится молекулярная картина человеческого организма.
При установлении материнства или отцовства исследуется максимальное количество локусов с высокополиморфными аллелями. В генотипе ребенка в любом из исследуемых локусов один из аллелей всегда совпадает с аллелем, полученным от матери, в другой – с аллелем, полученным от отца. На этом и основывается методика генетического исследования биологического родства: аллели ребенка сравнивают с аллелями предполагаемых родителей. Если в анализе ребенка отсутствуют как минимум два аллеля, совпадающих с аллелями предполагаемого родителя по одноименному хромосомному локусу, родство исключается.
В большинстве лабораторий для установления биологического родства используют анализ STR ‑локусов – участков ДНК длиной от 2 до 5 нуклеотидов. Аллели STR ‑локусов являются высокополиморфными, и установление отцовства (материнства) по ним снижает вероятность случайных совпадений генетических данных у обследуемых людей, поскольку таких локусов очень много. Генетический анализ на установление биологического родства следует отложить, если кто‑либо из обследуемых в последние шесть месяцев перенес трансплантацию костного мозга или переливание крови.
Чтобы увеличить достоверность исследования (точность не менее 99,9 %), рекомендуется проверка биоматериала, полученного не только от предполагаемого родителя, но и от человека, родство с которым бесспорно. Если материал для анализа сдан только одним из родителей, вероятность результата составляет 99,75 %.
Исследования крови при некоторых инфекционных заболеваниях
Вирусные гепатиты
Возбудителями гепатита могут быть несколько типов вирусов: А, В, С, D, Е, F, G и TTV . Для каждого вида возбудителя разработаны амплификационные тест‑системы, но наиболее ценным оказался метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) в диагностике вирусов гепатита В, С, D, G и TTV . Это обусловлено тем, что именно указанные возбудители больше всего ответственны за летальные, хронические и неопластические (вызывающие рак) исходы вирусных гепатитов у людей. В патогенезе вирусного гепатита решающую роль играют свойства вируса и генетически детерминированный характер иммунного ответа на этот возбудитель, поэтому не менее важна оценка иммунитета (определение CD‑4, CD‑8, CD‑56 и других фенотипов, уровня интерферонов).
Гепатит А не переходит в хроническую форму и потому не вызывает цирроза и рака печени. Вирус гепатита В имеет несколько антигенов, антитела к которым определяются для диагностики остроты и активности процесса, а также для оценки эффективности лечения и напряженности иммунитета. Гепатит В передается внутриутробно, половым путем, а также через сыворотку крови. Вирус гепатита С передается через сыворотку крови (реже половым путем и внутриутробно). Вирус гепатита D не существует в самостоятельной форме – он сочетается с вирусом гепатита В , усугубляя течение заболевания. Вирусный гепатит Е – вирусная инфекция из условной группы фекально‑оральных гепатитов, характеризующаяся поражением печени, острым циклическим течением и тяжелыми проявлениями у беременных. Вирусный гепатит F – еще один тип вирусного гепатита человека, вызывается вирусом со свойствами аденовируса. Клинико‑эпидемиологические характеристики данного гепатита схожи с таковыми при остром вирусном гепатите А . Вирусный гепатит G вызывает вирус из семейства флавивирусов и имеет несколько разновидностей. Пути передачи этого вируса – половой, парентеральный, трансплацентарный (от матери ребенку). Очень часто этот вид гепатита встречается у лиц, употребляющих наркотические вещества.
Суммарные антитела к вирусу гепатита А (анти‑ H AV суммарные, IgM ). Наличие в анализе IgG указывает на иммунитет к ранее перенесенному гепатиту А или бессимптомное носительство вируса, а присутствие IgM – на острое течение заболевания.
Антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В (анти‑ Hbs ). Антитела образуются через несколько недель после проявления HbsAg , то есть происходит выработка защитного иммунитета. Чтобы оценить естественный иммунитет, проводят качественный анализ, а для оценки напряженности прививочного иммунитета – количественный.
Антитела к внутреннему (ядерному) белку вируса гепатита В (анти‑ Hbc суммарные, IgM ) . Это основной анализ в диагностике гепатита В , он может быть положительным при отсутствии HbsAg . Суммарные антитела могут быть положительными даже после перенесенного заболевания. Положительный анализ на IgM наблюдается только при остром гепатите.
Антиген Е вируса гепатита В и антитела к нему ( НbsАg , анти‑ Нbs ). Это исследование назначают больным с длительно положительным HbsAg . Антиген Е появляется в крови при активном размножении вируса, антител к нему нет. Антитела появляются после перехода вируса в неактивное состояние и исчезновения антигена. Данное исследование антигена Е вируса гепатита В и антител к нему помогает оценить эффективность лечения.
Антитела к вирусу гепатита С (анти‑ HCV суммарные, IgM ). Наличие антител к вирусу гепатита С не свидетельствует о защитном иммунитете – этот анализ помогает поставить правильный диагноз. При положительном результате проводят поиск антигена РНК‑вируса. Наличие IgM указывает на острое течение болезни.
Суммарные антитела к вирусу гепатита D (анти‑ HDV суммарные, IgM ). Наличие суммарных антител не всегда указывает на острое течение заболевания – поставить точный диагноз позволяет только анализ на антиген вируса. Присутствие IgM свидетельствует об обострении болезни.
Вирус иммунодефицита человека
Анализ на антитела к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ) – это скрининговое исследование, позволяющее выявить ВИЧ‑инфекцию. Диагностировать и прогнозировать развитие синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) с помощью данного анализа невозможно, поскольку ВИЧ‑инфекция может переходить в СПИД в течение многих лет. Антитела, как правило, появляются на 4–12‑й неделе инфицирования, а иногда позже. Отрицательный результат не означает отсутствия ВИЧ‑инфекции. Повторный положительный анализ, указывающий на присутствие антител, свидетельствует о ВИЧ‑инфекции. Существует несколько тестов, которые помогают обнаружить антитела или генетический материал (РНК) ВИЧ.
Твердофазный иммуноферментный анализ (ЭЛАЙЗА) . Обычно этот тест является первым, с помощью которого выявляют ВИЧ‑инфекцию. Если антитела к ВИЧ присутствуют (положительная реакция), тест проводится повторно для подтверждения диагноза. Если ЭЛАЙЗА показывает отрицательный результат, другие тесты обычно не проводят. Иммуноблот проводят для подтверждения результатов двух положительных реакций на тест ЭЛАЙЗА.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR ) . Выявляет генетический материал (РНК) ВИЧ, который может быть обнаружен, несмотря на то что результаты других тестов окажутся отрицательными. Тест методом ПЦР очень важен для раннего обнаружения инфекции, определения наличия ВИЧ‑инфекции при неоднозначных результатах теста на антитела, а также для скрининга донорской крови и органов на маркеры ВИЧ перед пересадкой.
Непрямая реакция флюоресцирующих антител (НРФА) . Этот тест выявляет антитела к ВИЧ. Как и иммуноблот, он используется для подтверждения результатов теста ЭЛАЙЗА. Однако он более дорогостоящий, чем иммуноблот, и используется редко.
Краснуха
Острое вирусное заболевание, характеризующееся тем, что после него формируется пожизненный иммунитет. Чтобы точно определить, есть ли у человека иммунитет к краснухе, проводят тесты: реакцию связывания комплемента (РСК), иммуноферментный анализ (ИФА), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), а также выявление специфических антител класса IgM и IgG (табл. 45).
Таблица 45. Анализ на вирус краснухи
Динамику инфекции отслеживают по снижению количественных титров IgM и повышению IgG . На острый процесс указывает IgM +, IgG +.
Токсоплазмоз
Это паразитарное заболевание, характеризующееся поражением нервной системы, глаз, скелетной мускулатуры и мышцы сердца, а также увеличением лимфоузлов, печени и селезенки. Токсоплазмоз во время беременности может привести к развитию множественных пороков у плода и даже к его гибели. Заболевание склонно к хроническому течению. Заражение человека происходит при контакте с кошачьими испражнениями, землей и песком, загрязненными ими, а также при опробовании мясного фарша или употреблении недостаточно проваренного мяса. Баранина и свинина очень часто содержат токсоплазмы (от 10 до 25 %). Контакт с собаками, сельскохозяйственными животными к заражению людей не приводит. Больной человек для окружающих
