Для приготовления этой краски 1 г метиленового синего растворяют в 100 мл воды, добавляют 1 г углекислого калия и 20 мл 96 % спирта и медленно выпаривают на водяной бане до 100 мл. При этом образуются азур и метиленовый фиолетовый (в дополнение к метиленовому синему) [100].
79
Сам Максимов довольно мало пользовался этой странной жидкостью, приготовление которой очень трудоемко и явно лишено практического смысла для современной лаборатории (рецепт из [144]): 9 г сулемы залить 100 мл воды и нагреть до 90 °C, остудить до 48 °C и слить жидкость с осевших кристаллов в банку с притертой пробкой, куда налито 13 мл раствора йода (10 г на 120 мл 90 % этанола); как только выпадет обильный осадок и покажутся фиолетовые пары йода, жидкость фильтруют в стакан с разбавленным формалином (8 мл на 35 мл воды), предварительно нагретым до 38 °C и поставленным в большой стакан с водой той же температуры; стакан накрывают, чтобы избежать удаления паров йода и в этой теплой жидкости фиксируют пленочные препараты 5–8 минут, после чего промывают в 2 порциях воды по 15 минут; фиксатор каждый раз готовят заново.
80
«Глицериновый эфир»: 50 мл глицерина и 10 г сухого хлорида кальция помещают в колбу для перегонки и собирают фракции, перегоняющиеся при 120–220 °C. Полученную коричневую жидкость смешивают с животным углем и еще раз перегоняют. При этом получается светло-желтый дистиллят, который перегоняется уже при 100 °C. Если видна небольшая муть, то ее удаляют прибавлением следов абсолютного спирта [100].
81
Концентрация кислого фуксина, которые указывают во всех прописях окраски по Альтману (Куллю), совершенно неадекватно завышена – 10–20 г (!) на 100 мл анилиновой воды (такое количество краски просто не растворяется и только служит причиной грязных осадков). Для нормальной окраски вполне достаточно 1 % раствора. Кроме того, обычно рекомендуемое нагревание каждого препарата на спиртовке (до появления паров) – очень грязная и неудобная процедура. Гораздо эффективнее и чище вести эту окраску в кювете с предварительно нагретым красителем в термостате при 60 оС в течение 30 минут, причем таким образом можно окрашивать сразу множество препаратов.
82
В этом отношении более подходящим кажется метод Волконского, в котором ауранция заменена на занчительно более доступный оранж Ж [101]. Между прочим, методы выявления митохондрий с кислым фуксином прекрасно (и даже надежнее) удаются после формалин-бихроматных фиксирующих смесей без осмия.
83
Эта методика может быть полезна и сегодня, поскольку она позволяет легко отыскивать базофилы в препаратах крови даже при малом увеличении, так как только их зерна окрашиваются в красно-фиолетовый цвет и хорошо видны на фоне зеленоватых или сероватых эритроцитов, и их нельзя спутать с синеватыми ядрами других клеток. Большим недостатком этого метода является необычайно легкое обесцвечивание препарата при ополаскивании спиртом, почему мазки крови после окраски лучше не ополаскивать, а промакать от краски фильтровальной бумагой (хотя это часто ведет к появлению в препарате грязи из кристаллов тионина). Между прочим, окраска алкогольным тионином была бы очень полезна с педагогическими целями, так как продемонстрировать базофил человека на мазке крови, окрашенном обычными методами, иногда невозможно. И не только потому, что их мало и они сложно отыскиваются на пестрых мазках, окрашенных по Романовскому – Гимзе: число видимых базофилов оказывается значительно меньше действительного за счет утраты зерен большинством из них при окраске водными растворами красителей.
84
Для дифферецировки и обезвоживания, см. примечание 88.
85
Сегодня эта методика выполняется несколько иначе [54, 194]. Во-первых, воду для красящих растворов следует брать высшей степени очистки – минимум бидистиллированную. Во-вторых, ее следует прокипятить около получаса для удаления углекислоты. Затем следует довести ее рН до 6,8–7,0 с помощью нескольких капель слабого раствора двухуглекислого натрия или приготовить раствор на соотвествующем фосфатном буфере (что, как ни странно, иногда дает худшие результаты). О подходящем качестве раствора говорит появление на поверхности его тонкой металлической пленки, но не грубого зернистого осадка (осадок, выпавший через несколько часов, не вредит). Еще лучший результат получается, если выполнить на срезах методику Паппенгейма, то есть, сперва около получаса окрасить срезы в растворе красителя Май – Грюнвальда (1 мл краски на 15 мл воды) и промыть водой, а затем окрасить по Гимзе. Все эти правила справедливы и для окраски азур-эозином.
86
Для амфибий, у которых эритроциты часто окрашиваются в зеленый цвет, Максимов предлагает другое соотношение компонентов смеси: раствора эозина – 16 мл, азура – 8 мл, воды – 80 мл {42}.
87
Часто окрашивание следует проводить намного дольше, до 12–24 часов {42}. Кроме того, для получения особенно насыщенного тона Максимов рекомендует уменьшать объем воды в смеси до 8 мл.
88
Максимов {42} предлагает дифференцировать срезы в 95° спирте до тех пор, пока не перестанут отходить голубоватые облачка, что занимает 1–2 минуты. Лучше, однако, вначале дифференцировать срез в 0,1 % растворе уксусной кислоты (до прекрашения отхождения облаков синей краски), а затем только на несколько секунд поместить препарат последовательно в две порции спирта (по появления на срезе сиреневого тона), так как сколько-нибудь длительное пребывание в спирте легко портит окраску азуром. Дальше – две порции ксилола и заключение среза.
89
В течение 24 часов {22}. Рецепт этого гематоксилина имеется во многих руководствах, например в [54].
90
Автор книги пробовал вопроизвести трихром Максимова на препаратах, фиксированных формалином, по Карнуа и ценкер-формол-осмием. Метод оказался совершенно не элективным, и к тому же постоянно давал разные картины. Кроме того, большие проблемы вызывало заключение препаратов, окрашенных этим трихромом, поскольку краски, особенно ауранция, мгновенно вымывались из препарата спиртом и даже ксилолом, так что окраска часто получалась бледная или грязная.
91
Иногда целлоидиновые камеры заполнялись также раствором агар-агара, в который грануляционная ткань, однако, не прорастала.
92
Carrel. Die Kultur der Gewebe ausserhalb des Organismus. Berl. Klin. Wochenschr., B. 48, 1911. Он же. Neue Untersuchungen über das selbständige Leben der Gewebe und Organe. Berl. Klin. Wochenschr. 1913, № 24. Он же. Neue Fortschritte in der Kultivierung der Gewebe ausserhalb des Organismus.Berl. Klin. Wochenschr. B. 49.– прим. А. А. Максимова.
93
Drew, G. Harold. On the Culture in vitro of some tissues of the adult frog. The Journal of
