Эрлих впервые разделил лейкоциты по характеру зернистости) можно найти в руководствах С. С. Чашина и Б. Ромейса [47, 100, 183], описывать его здесь будет нецелесообразно в связи с редкой встречаемостью в работах Максимова, относительной сложностью и ничтожной практической значимостью.
Пользовался Максимов и прижизненными окрасками культур ткани и соединительнотканных клеток in vivo – трипановой или изаминовой синью, нейтральным красным и янусом зеленым. Никаких особых методических приемов им в этом отношении не предложено, за исключением витального способа приготовления окрашенной культуральной плазмы (см. ниже раздел о клеточных культурах).
Рисунки Максимова, выполненные с препаратов, окрашенных нейрогистологическими методами, единичны и все они относятся к иллюстрациям из второго тома «Основ гистологии» {56}. Это препарат нейрофибрилл, окрашенных «серебрянным методом» (возможно, заимствованный из диссертационной коллекции В. М. Данчаковой, которая пользовалась методом Рамон-и-Кахаля), препарат «хроматофильного вещества», выявленного, очевидно, по методу Ниссля и расщипанный препарат, демонстрирующий мякотные оболочки нерва, импрегнированные осмием. Детали изготовления этих препаратов в максимовской лаборатории неизвестны.
Наконец, перейдем к главному – к гематологическим окраскам, которые применялись Максимовым.
В его лаборатории применялись два основных метода – способ Доминичи и азур-эозин по Нохту {42}. Несмотря на то, что первый способ сегодня практически забыт, он, по Максимову, незаменим, когда речь идет об окраске клеток крови в тотальных препаратах желточного мешка и других подобных объектов. Дело в том, что азур-эозин красит такие препараты очень грязно, а метод Доминичи дает примерно такой же результат, как и при окраске срезов азур-эозином. По Максимову, обязательным условием успеха этих методов окраски является не только фиксация ценкер-формолом или ценкер-формол-осмием, но и заливка в целлоидин, так как после любой парафиновой заливки окраска получается более диффузная и несколько страдает окрашивание гемоглобина (что заметно, правда, только при непосредственном сравнении этих препаратов). Еще одним методом, который широко применялся в лаборатории Максимова и считался его изобретением, была окраска базофилов крови в мазках и тучных клеток в срезах алкогольным раствором тионина по прописи Михаэлиса {28}[83].
Описания всех названных методов разбросаны в разных работах А. А. Максимова на немецком языке {28, 29, 31, 40, 41, 42, 53}, потому здесь для простоты будет приведен соотвествующий им лаконичный русский текст из выполненной в максимовской лаборатории диссертации Н. П. Солухи с небольшими добавлениями в примечаниях.
«Для окраски по Dominici (D) препарат переносится в водный раствор Eosin-Orange’a (Eosin 0,25 + Orange G 0,3 + воды 50,0) на 20 или 30 минут. После этого препарат быстро промывают в 60° спирте и красят в Toluidinblau (Toluidinblau 0,25 + воды 50,0) полминуты или минуту; затем спирт 96°[84], масло, ксилол и бальзам.
По Тишуткину (Т) делается смесь насыщенного в 96° спирту Jodeosin’a с насыщенным водным раствором Orange G и в этой смеси препарат красят, как по Dominici, и затем также и Toluidinblau.
Раствор Methylen-Azura’a по Giemsa (G) употреблялся таким образом, что на 1 ссm [на 1 см3. – В.М.] воды прибавляется одна капля этой краски (готовой от Grübler’a) и в эту смесь быстро переносят препараты, которые остаются в ней в течение 2-х часов, потом следует вода, спирт, масло и т. д.[85]
Для окрашивания Eosin-Azur’ом по Nocht’у (EoAz) препарат переносят в смесь водного раствора Eosin’a 1:1000 с водным раствором Azur’a II тоже 1:1000, приготовленную ex tempore в таких отношениях: 1 ccm раствора Eosin’a + 10 ccm воды смешивается с 1 ccm раствора Azur’a[86]. Окрашивание идет 6 часов[87] и потом следует вода, спирт[88], масло и т. д.
Для окрашивания алкогольных препаратов Thionin’ом (Th) и Cre-sylechtviolett’ом (Cr) нужно приготовить эти краски значительно ранее употребления их. Делают насыщенный спиртовый (60°) раствор той и другой краски. Через несколько дней профильтрованный раствор Thionin’a подщелачивается двумя каплями 2 % водного раствора Natri carbonici на каждые 10 ccm раствора краски и оставляется на несколько дней. Раствор Cresylechtviolett’а подкисляют ледяной уксусной кислотой (0,2 кислоты на 10 ccm краски) и употребляют только через несколько дней после этого. При подкислении раствор этой краски несколько меняет свой цвет, приобретая красноватый оттенок. Перед употреблением обе краски фильтруют. В Thionin’е окрашивание препарата происходит в течение 24-х часов, а в Cresylechtviolett’е 6 часов. Затем следуют спирт, масло и т. д.
Весьма важно употреблять только чистейший нейтральный канадский бальзам от [фирмы] Grübler’a» [112, С. 14–15].
Мазки крови и костного мозга Максимов окрашивал азур-эози-ном или по методу Паппенгейма (Май – Грюнвальд – Гимза), который и сегодня является общепринятым рутинным приемом во всех гематологических лабораториях мира.
Теперь рассмотрим оригинальные методы окраски, предложенные А. А. Максимовым.
Во-первых, это только что описанная адаптация метода окраски спиртовым раствором тионина или крезилвиолетта.
Во-вторых, это модификация метода окраски азур-эозином, при которой ядра предварительно подкрашиваются квасцовым гематоксилином. К сожалению, автор не опубликовал описания этого метода и показания к его применению. Ю. А. Криволапов [49] приводит некую «модификацию» якобы оригинального максимовского способа, которому его обучили на кафедре гистологии ВМА и которая передавалась устно из поколения в поколение. Приводить здесь эту пропись будет нецелесообразно (хотя в руках самого автора она дала очень хорошие результаты), поскольку ее можно найти в книге самого Криволапова, но главным образом потому, что ее аутентичность вызывает большие сомнения. Нет никаких оснований предполагать, что такие необычные для гистологической лаборатории максимовского времени (но вполне обычные сегодня) вещества, как диметилсульфоксид или изопропиловый спирт, могли войти в пропись Максимова. Думается, что он просто красил ядра разбавленным гематоксилином Делафильда 24 часа (хотя лучше всего для этого подходит гематоксилин Караччи, за 3–5 минут дающий чистую окраску ядер), а затем вел окраску по Нохту Окраска с гематоксилином хороша только тем, что ядра при ней будут гарантированно окрашены даже при неподходящем рН красящего раствора (не нейтральном, как должно, а очень кислым). Это нарушение, однако, вредно, и окрашенные ядра в действительности могут замаскировать картину, при которой суждение о базофилии или оксифилии гистологических структур уже недопустимо. Поэтому такой прием можно рекомендовать только для окраски препаратов птиц и низших позвоночных, содержащих ядерные эритроциты, поскольку комковатые ядра этих клеток крайне трудно адекватно окрасить с помощью обычной окраски азур-эозином.
О третьем методе Максимова стоит сказать буквально два слова. Это окрашивание мазков, фиксированных жаром по Эрлиху 1 % водным раствором эозина (10 минут) и метиленовым синим Лёффлера (обычно применяемым для выявления бактерий, 5–8 секунд). Именно после такой окраски молодой и начинающий исследователь Максимов увидел в эритроцитах «нуклеоиды» и решил, что именно из них образуются кровяные пластинки {12}. Этот метод, конечно, не имеет никакой
