ПЦР . Особую ценность для диагностики ВИЧ имеет ПЦР в начале болезни – еще до появления антител, когда инфицирование уже произошло, а также на поздних стадиях заболевания, когда количество антител может снижаться вплоть до полного исчезновения. Однако чувствительность метода ПЦР в целом на 1–2 % ниже, чем чувствительность ИФА. В свою очередь, это может приводить к появлению ложноотрицательных результатов. Специфичность ПЦР во многом определяется качеством используемых в наборе ингредиентов, особенно праймеров.
В настоящее время наиболее важным прогностическим критерием инфекции стал показатель РНК ВИЧ. Показано, что риск развития СПИД и смерти прямо связан с исходным показателем РНК ВИЧ в крови. Этот показатель оказался информативнее, чем число СД-4 лимфоцитов. Определение показателя РНК ВИЧ позволило оценить выживаемость пациентов: при уровне менее 5000 копий/мл прогнозируемая длительность жизни превышала 10 лет; при показателе 5—13 тыс. копий/мл средняя продолжительность жизни составила 9,5 г.; при уровне 13–36 тыс. копий/мл – 7,4 г.; при уровне более 36 тыс. копий/мл – 5,1 г.
Микоплазменная и уреаплазменная инфекции
Возбудители этой группы инфекций – микоплазмы – одни из самых мелких прокариотов. Согласно классификации их причисляют к семейству Mycoplasmataceae. Это семейство дифференцируют на 2 рода – Mycoplasma, включающий в себя около 100 видов, и Ureaplasma, насчитывающий 3 вида. Микоплазмы, паразитирующие у человека, бывают 5 видов – M. pneumonie, M. genitalium, M. hominis, M. incognitis, U. urealiticum. Микоплазмы – группа мелких микроорганизмов (150–200 нм), имеющих способность к размножению на бесклеточных средах.
Особые признаки микоплазм и уреаплазм – это отсутствие обычной клеточной стенки и способность паразитировать на поверхности клеток хозяина. Микоплазмы отграничены от окружающей среды лишь трехслойной цитоплазматической мембраной. В цитоплазме имеются нуклеотид, распределенный в виде нитей ДНК, внутрицитоплазматические мембранные структуры, рибосомы. Клетки могут быть разнообразны по форме: глобулы, нитевидные, грушевидные. Диаметр сферических клеток составляет от 0,3 до 0,8 мкм. Микоплазмы относят к грамотрицательным микроорганизмам, они обладают низкой чувствительностью к большинству красителей. В последнее время доказано, что микоплазменная инфекция влияет на репродуктивную функцию. Уреаплазменная инфекция приводит к снижению подвижности сперматозоидов, возникновению «пушистых хвостиков», так как «прилепляются» к их поверхности, возникновению незрелых форм сперматозоидов и изменению структуры клеток (к примеру, спирализации). Уреаплазмы также могут затруднять процесс проникновения сперматозоидов в яйцеклетку. А заражение эндометрия может приводить к инфицированию зародыша и прерыванию беременности на ранних сроках.
Микробиологический метод . Для него берут пробы со слизистой уретры, периуретральной области, сводов влагалища, из канала шейки матки. Пробы мочи для выделения микоплазм желательно брать из утренней первой порции. Также можно брать для посева секрет простаты. Микробиологическому исследованию подлежат сперма, воды, ткани абортированных плодов, полученные при амниоцентезе.
В настоящее время показано, что все виды микоплазм можно выращивать на искусственных средах, в основу которых входят высококачественные пептоны, например триптиказно-соевый бульон, ферментативный перевар из бычьих сердец. Для выявления чувствительности выделенной культуры к антибиотикам применяют метод разведений в жидкой среде.
Серологические методы обнаружения микоплазменной инфекции основываются на выявлении специфических антител, которые определяются с помощью реакции пассивной гемагглютинации. А для выявления антигенов возбудителей применяют реакцию агрегат-гемагглютинации, реакцию прямой и непрямой иммунофлюоресценции. Следует отметить, что гуморальные антитела к Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis могут присутствовать у клинически здоровых лиц. Также инфицирование людей Ureaplasma urealyticum может не всегда сопровождаться повышением уровня антител.
Метод ПЦР. В этом случае исследуются соскобы из уретры, со стенок влагалища и цервикального канала. Следует помнить, что при взятии материала из цервикального канала необходимо убрать слизистую пробку. Ее удаляют ватным тампоном и лишь затем берут материал.
Весьма чувствительными являются методы люминесцентной и иммунолюминесцентной микроскопии.
Глава 9. Инфекционные заболевания
Инфекционные заболевания – заболевания, которые являются результатом взаимоотношений макроорганизма, микроорганизма и внешних факторов. Микроорганизм должен быть патогенным или условно-патогенным по отношению к макроорганизму, что является одним из основных условий возникновения инфекции.
Классификация
Общепринятой классификации не существует. Наибольшее применение получила классификация по Л.В. Громашевскому, основанная на механизме распространения возбудителя. Согласно этой классификации инфекционные заболевания делятся на:
1) кишечные инфекции;
2) инфекции дыхательных путей;
3) «кровяные» инфекции;
4) инфекции наружных покровов;
5) инфекции с различными механизмами передачи.
Кишечные инфекции
Брюшной тиф, паратиф А, паратиф В
Брюшной тиф, паратиф А, паратиф В – кишечные инфекционные заболевания, которые объединены схожими возбудителями, клиникой, патогенезом. Характеризуются возбудителями рода сальмонелл, которые поражают лимфатическую систему тонкого кишечника, легко проникают в кровь, создавая бактериемию и, как следствие, выраженную интоксикацию, гепатоспленомегалию (увеличение печени, селезенки).
Очень важно рано диагностировать брюшной тиф и паратифы, так как заболевания отличаются высокой заразностью больного, которая увеличивается с каждым днем заболевания.
В диагностике тифов большое значение имеют лабораторные данные. В лабораторной диагностике применяют бактериологический и серологический методы исследования. Среду наибольшего пребывания возбудителя определяет период заболевания. Первые 10–14 дней возбудителя больше всего обнаруживается в крови, до 20 дней – в фекалиях. В течение всего заболевания возбудитель обнаруживается в дуоденальном содержимом, и потому исследование этой биологической среды дает наиболее достоверную информацию о наличии или отсутствии тифа, несмотря на период. Выделение культуры микробов в крови показывает высокую интенсивность инфекционного процесса. Обнаружение возбудителя в фекалиях указывает на высокую заразность заболевания или бактерионосительство. Бактерионосительство подтверждается отсутствием клинической картины и реакцией непрямой гемагглютинации с Vi-антигеном.
Идентификация возбудителя с изучением его свойств происходит в ходе бактериологического исследования, одним из результатов которого является выделение культуры из биологических сред человека. Это происходит за счет посева препаратов, приготовленных из этих биологических жидкостей, на питательную среду.
Положительные результаты посева крови (выделения гемокультуры) при брюшном тифе возможны с первого дня заболевания и до завершения лихорадочного периода. Кровь получают из вены и засевают во флакон с питательной средой: 10–20 %-ный желчный бульон или среда Раппопорта. Эти среды являются элективными.
Для получения возбудителя (подтверждения диагноза) возможно использование мочи, кала, желчи. С этой целью препараты засевают на среду Плоскирева и получают соответственно урино-, копро-, биликультуры. Недостатком бактериологического метода является большая потеря времени, которое необходимо для роста культуры.
Гораздо быстрее подтвердить заболевание, используя серологические методы (диагностические методы, в основе которых лежит реакция взаимодействия антиген-антитело), которые применимы для экспресс-диагностики (результат получают сразу, возможно массовое обследование в случае эпидемической вспышки).
Применяют иммунофлюоресцентные и иммуноферментные методы, в ходе которых выявляют специфический антиген в крови. В качестве серологической диагностики тифопаратифозных заболеваний раньше использовали реакцию агглютинации Видаля. В настоящее время используется более чувствительная реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритроцитарными диагностикумами. РНГА применима с 5—7-го дня болезни. Положительной считается реакция, если она произошла в титре не менее 1: 200.
Метод заключается в исследовании парных сывороток, взятых в динамике заболевания. Для постановки диагноза необходимо четырехкратное и более нарастание титра антител к возбудителям брюшного тифа и паратифов.
